アニメ化においてファンの関心が集中するもう一つの柱が、主人公たちの配役です。特にゲーム作品（『オールスターバトル』や『アイズオブヘブン』）で声を担当した声優陣がそのままアニメに起用されるのか、それとも過去作同様に一新されるのかが注目されています。
ゲーム版におけるジョニィ ジョースター 声優は梶裕貴氏、相棒であるジャイロ ツェペリ アニメ（ゲーム版）声優は三木眞一郎氏が演じており、その圧倒的な演技力はファンの間でも非常に高い評価を得ています。
しかし、ジョジョシリーズのアニメ化における歴史を振り返ると、ゲーム版からテレビアニメ版への移行に際して主要キャストが変更された例は少なくありません。
- 第4部 東方仗助：羽多野渉氏（ゲーム） ➔ 小野友樹氏（アニメ）
- 第5部 ジョルノ・ジョバァーナ：浪川大輔氏（ゲーム） ➔ 小野賢章氏（アニメ）
- 第6部 空条徐倫：沢城みゆき氏（ゲーム） ➔ ファイルーズあい氏（アニメ）
第3部の空条承太郎（小野大輔氏）のように続投した前例もありますが、アニメ化のオーディションは毎回厳格に行われています。梶裕貴氏や三木眞一郎氏がそのままキャスティングされる可能性はもちろん十分ありますが、新たな実力派声優が選ばれる可能性も等しく存在します。どちらのケースになっても、荒木作品特有の熱量と魂のぶつかり合いを表現できる盤石のキャスティングが期待されます。
